Пцр показал что есть воспаление

Инфекции

Видео: Нормальные выделения из влагалища. Воспаление влагалища.

Пцр показал что есть воспаление

Лечение различных инфекций в гинекологии – это «хлеб» современной коммерческой гинекологии. В своей практике я просто использую американские и европейские стандарты лечения и диагностики – и, как ни странно, есть эффект. В этой публикации я хотел бы просто и коротко рассказать о том, что и как диагностируется и как в большинстве случаев это лечится.

Прежде чем внести ясность в этот вопрос, я хотел бы развеять несколько мифов:

не бывает диагноза «гарднереллез» – сейчас это состояние называется «бактериальный вагиноз»
не бывает «программ лечения – хламидиоза, микоплазмоза, уреаплазмоза, трихомониаза, гарднереллеза и т.д.» по 17-30 тысяч за заболевание
вирус папилломы человека 16,18 типа – не означает, что у вас обязательно будет рак шейки матки
в схему лечения инфекций не может входить 5-7-10 препаратов

Давайте разбираться!

Итак, согласно ВОЗ (Всемирная Организация Здравоохранения) существует всего 5 инфекций, передающихся половым путем:

Сифилис
Гонорея
Хламидиоз
Трихомониаз
ВИЧ

Другие возбудители, такие как герпес и вирус папилломы человек – относятся с заболеваниям, преимущественно передающимся половым путем.

Для таких возбудителей как: уреаплазма и микоплазма – до сих пор место не нашлось, о них мы поговорим ниже.

Возбудители инфекций бывают специфическими (все перечисленные выше) и неспецифическими (флора кишечника, кожи)

Далее, воспалительные заболевания женских половых органов делятся на:

Вульвовагиниты (воспаление влагалища и наружных половых органов)
Цервициты (воспаление шейки матки)
Воспалительные заболевания органов малого таза (ВЗОМТ) к ним относятся: эндометрит (воспаление слизистой оболочки матки), сальпингит (воспаление труб), сальпингооофорит (воспаление труб и яичников), эндомиометрит (воспаление слизистой и мышечной оболочки матки) панметрит (воспаление всей матки) и как осложнение тазовый перитонит (воспаление брюшины малого таза)

Теперь разберемся, какие бывают вагиниты – то есть если у вас есть плохие выделения из влагалища, то это (за исключением редких случаев) может быть:

Трихомониаз
Бактериальный вагиноз (другими словами нарушение флоры)
Кандилозный вульвовагинит (молочница)

Редко:

Атрофический вагинит (у пожилых женщин на фоне дефицита гормонов)
Химический или аллергический (раздражение)

И все!!! Больше мировая медицина не классифицирует ничего. Только эти причины (повторюсь за исключением редких случаев) могут приводить к воспалению влагалища.

Однако, выделения из половых путей могут быть обусловлены воспалением шейки матки и органов малого таза.

Воспаление шейки матки вызывают наиболее часто:

Гонококки (возбудители гонореи)
Хламидии (возбудители хламидиоза)

Вирусы папилломы человека и др. могут вызывать воспаление шейки матки, но несколько с другми проявлениями.

При воспалении органов малого таза, также могут быть выделения из половых путей, но при этом будут и другие симптомы.

Подводим итог:
Если у вас есть необычные выделения из половых путей, то это может быть только: бактериальный вагиноз, трихомониаз, кандидозный вульвовагинит (молочница), гонорея, хламидиоз, или проявления воспаления органов малого таза. Редкие состояния не рассматриваем.

Теперь о методах диагностики… (больше всего обманов именно здесь)

В обычной гинекологической практике необходимо только 4 метода диагностики инфекций.

Бактериоскопия мазка (это обычный мазок на флору)
Бактериологический посев (при этом высевают полученный материал на специальные среды и определяют чувствительность к антибиотикам)
ПЦР – (метод полимеразной цепной реакции) – позволяет определить ДНК возбудителя
Серологические методы – позволяют по специфической реакции организма на инфекцию подтвердить ее наличие, определить стадию (острая, хроническая)

Все, этого арсенала вполне достаточно, чтобы диагностировать все необходимые инфекции.

Теперь подробнее о каждом методе.

Бактериоскопия мазка

Этот метод показывает только:

Наличие или отсутствие воспаления (по количеству лейкоцитов) – ВНИМАНИЕ! много лейкоцитов при отсутствие воспаления может быть следствием попадания в мазок крови.
Диагностировать следующие заболевания (гонорея, трихомониаз, молочница, бактериальный вагиноз)
Обнаружить неспецифическую флору (при воспалении, вызванном неспецифическими микроорганизмами)
Описать состояние нормальной флоры влагалища

Таким образом, с помощью обычного мазка вам должны поставить или исключить следующие диагнозы:

Гонорея
Бактериальный вагиноз (хотя и существует 4 критерия постановки этого диагноза в клинической практике достаточно характерного цвета выделений, рыбного запаха и наличия ключевых клеток в мазке)
Кандидозный вульвовагинит (молочница)
Заподозрить наличие воспалительного процесса в органах малого таза (лейкоцитоз, неспецифическая флора)
Трихомониаз (сложный диагноз: в высохшем мазке у трихомонад отпадают жгутики и они становятся не отличимые от макрофагов (обычных клеток крови), поэтому диагноз можно не поставить, про трихомониаз см. ниже)

Бактериологический посев

Этот метод позволяет определить состав флоры и количество возбудителя (то есть много его или мало), и кроме этого, установить, к каким антибиотикам в наибольшей степени он чувствителен.

Бак.посев чаще всего берут из влагалища, канала шейки матки и полости матки.

Когда целесообразно брать бак.посев:

Если в мазке обнаружено много лейкоцитов и неспецифическая флора
В программе лечения бесплодия или перед плановой беременностью (посев берется из цервикального канала и полости матки)
При выявлении в ПЦР уреаплазмы (посев проводится на специальной среде)
При лечении всех видов ВЗОМТ

В целом это все, больше распространенных показаний нет. Назначать бак.посев в других случаях, или просто так – не целесообразно.

ПЦР

Это самый распространенный метод диагностики в настоящий момент и именно с ним связано большинство недоумений.

Этот метод диагностики позволяет определить ДНК возбудителя, то есть при использовании этого метода мы отвечаем только на один вопрос – если в материале хотя бы несколько специфических фрагментов микроорганизма.

О чем это говорит – положительный результат может быть даже в случае если микроорганизмов крайне мало и если микроорганизм уже погиб (но ДНК осталась).

Когда это имеет значение – если контроль после лечения проведен слишком рано (остались погибшие микроорганизмы) – можно решить, что лечение оказалось не эффективным. В другом случае поставить диагноз, при том что возбудителя заболевания крайне мало (это имеет значение при вопросе о необходимости лечения уреаплазмоза).

Какие инфекции имеет смыл диагностировать с помощью ПЦР:

Хламидии (в мазке они не определяются)
Вирус папилломы человека
Вирус простого герпеса
Цитомегаловирус (имеет значение преимущественно перед плановой беременностью или во время нее)
Уреаплазма (только Parva, T960 – нет)
Микоплазма ?

Все, другие возбудители диагностируются в обычном мазке или вообще не имеют значения. И нет никакого смысла определять методом ПЦР (гонорею, бактериальный вагиноз или молочницу) Крайне редко, в спорных случаях это возможно, но всем подряд – крайне не целесообразно. Поэтому когда вам предлагают сдать анализ ПЦР на 10-15, то 20 возбудителей – помните – это не целесообразно!!!

Серологические методы

При использовании этого метода определяется был ли когда-нибудь или имеется ли в настоящее время контакт организма с конкретным возбудителем заболевания. При этом оценивается количество специальных белков крови (иммунноглобулинов), которые бывают нескольких классов. Как правило определяют три класса M,G и A. О чем говорит наличие каждого из этих классов иммунноглобулинов?

Иммуноглобулины класса М (IgM) – появляются в крови первыми, сразу же после контакта организма с возбудителем заболевания постепенно нарастают, а потом исчезают. То есть наличие IgM говорит о том, что заболевание находится в острой стадии и протекает в вашем организме в настоящий момент.
Иммунноглобулины класса G (IgG) – по сути отражают память иммунной системы о контакте с возбудителем – это значит, что их наличие указывает на то, что вы когда-то болели этим заболеванием, заболевание прошло острую фазу (IgM уже пропали), что у вам была сделана прививка или у вас есть иммуннитет к этому возбудителю. Концентрация (титр) этого иммунноглобулина пр контакте с возбудителем нарастает совместно с IgM, затем IgM исчезает, а титр IgG сохраняется на высоком уровне и постепенно уменьшается.
Иммунноглобулин класса А (IgA) – этот иммунноглобулин в основном ответственен за обеспечение местного иммунитета слизистых оболочек, но его растворимая форма имеет значение при повышении его титра в крови при диагностике хламидиоза.

Титры (концентрации) описанных выше иммунноглобулинов бывают разными и трактовать эти показатели можно по-разному. Бывает, что титр иммунноглобулина бывает сомнительным и сделать заключение по такому анализу трудно.

Итак, с помощью серологического метода можно определить:

наличие острой стадии заболевания (присутствие IgM)
наличие иммунитета к конкретному возбудителю (наличие Ig G; например к краснухе, гепатиту и.т.д.)
установить факт недавно перенесенного заболевания (высокие показатели IgG)
факт носительства (к примеру, для герпеса – наличие IgG)

Теперь разберемся, как это работает на практике – самые распространенне случаи.

Кандидозный вульвовагинит (молочница)

Симитомы: зуд, белые творожистые выделения
Анализы: достаточно осмотра и общего мазка
Лечение: обычно хватает 1-2 приемов флюконазола (по 150 мг – дифлюкан, дифланзон и.т. д.) или свечи – диапазон большой. Дополнительно ничего не требуется.

Бактериальный вагиноз
Симптомы: белые сливкообразные выделения, запах “рыбы”
Анализы: достаточно осмотра и общего мазка (в мазках – гарднереллы и ключевые клетки), пцр и др. исследования избыточны.
Лечение: 2 варианта: трихопол (метронидазол) или орнидазол (орнидазол) по 500 мг 2 раза в день после еды или свечи далацин (клиндамицин) – 3-5 дней. Все.

Трихомониаз

Симптомы: водянистые пенистые выделения из половых путей
Анализы: осмотр, мазок (в мазке часто не обнаруживаются), ПЦР (может не показать), есть достоверный метод – смотреть мазок сразу же после забора в капл, но его практически никто не делает.
Лечение: всего два препарата: метронидазол (Трихопол) и орнидазол (Тиберал) – принимаются одинаково по 500 мг два раза в день после еду – 5 дней. В 90% случаев этого достаточно.

Трихомониаз – видео версия:

Пцр показал что есть воспаление

Гонорея

Симптомы: зеленовато-желтоватые выделения, могут быть просто мутноваты
Анализы: осмотр, мазок, можно дополнить ПЦР
Лечение: обычно досточно 1-2 уколов (к примеру, Роцефин 1 гр. внутримышечно 1 раз в день 2 дня)
Обычно гонорея сочетается с хламидиозом иили трихомониазом, поэтому к лечению добавляют трихопол или тиберал на 5 дней и берут ПЦР на хламидии – при выявлении хламидий лечение дополняют.

Хламидиоз

Симптомы: как правило, сомптомов нет, или просто имеются более обильне выделения измененного цвета
Анализы: ПЦР, можно дополнить анализом крови на IgG и Ig A к хламидиям
Лечение: несколько вариантов: азитромицин (Сумамед) по 1 гр. на 1й-3й-7й и 14 день лечения однократно; вильпрофен (джозомицин) по 1т 2 раза в день 10-14 дней (или 1 таб. 3 раза в день 10 дней) – много разных схем. Есть и другие схемы с другими антибиотиками, но они используются реже. Важно – никаких иммунномодуляторов, ферментов и пр.

Герпес

Симптомы: болезненные пузырьки, которые лопаются и на их месте образуются эрозии.
Анализы: осмотр, ПЦР, кровь на IgG и Ig M к герпесу.
Лечение: ацикловир, валтрекс – схемы и дозы разные
Важно: за несколько дней до появления пузырьков и после полного заживления, можно заражать герпесом партнера.

Несколько слов про уреаплазмы и микоплазмы. Сначала небольшой обзор.

Уреаплазмы и микоплазмы

Видео: Уреаплазма

Пцр показал что есть воспаление

Роль этих возбудителей в гинекологической и урологической практике довольно неоднозначна. Так получилось, что в нашей стране с приходом ПЦР диагностики эти возбудитетли стали в один ряд с инфекциями, передаваемыми половым путем, и стали разрабатываться самые разнообраные схемы их лечения.

При этом отношение запада к этим возбудителям сохранялось спокойным.

До сих пор в Америке и Европейских странах рутинного скрининга пациентов на аналичие этих возбудителей не проводится. Выявление уреаплазм и микоплазм признано трудоемким, и в основном проводится в научно орентированных лабораториях. Все же внимание к этим возбудителям на западе есть.

Уреплазмы и микоплазмы считаются комменсалами (живут в норме) в половых путях как мужчин, так и женщин. По различным данным более чем у 60% сексуально активных женщин выявялется уреаплазма.

Большое внимание уреаплазменной инфекции уделяется в отношении ее роли в акушерской патологии. Отдельные исследования показывают значение этого возбудителя в формировании таких состояний как: хорионамнионит, преждевременный разрыв плодных оболочек, преждевренные роды, гипотрофия плода. Важно отметить, что уреплама во всех этих случаях выявлялась в околоплодной жидкости, а не в цервикальном канале.

Роль уреплазменной инфекции была выявлена в формировании пневмонии у новорожденных и хронических заболеваний легких, не зависимо от вида родоразрешения. Этот возбудитель выявляется в трахее новорожденных, в большей степени у рожденных до 34 недель. Так у новорожденных весом менее 2500 гр. уреплазма выделется в 34% случаев.

В то же время у доношенных детей уреаплазменная инфекция легких – редкость. В частности это объясняется тем, что частота уреплазменных хорионамнианитов (воспаление околоплодных оболочек) выше до 32 недель. Наличие хорионамнионита сказывается на трансплацентарном пассаже иммуноглобулинов, что приводит к более высокой инфицированности новорожденных, родившихся раньше срока.

Вы заметили, что ни в одной схеме лечения я не использую иммунномодуляторы и другие препараты.

Не секрет, что западная медицина не использует иммуномодуляторы в схемах лечения воспалительных заболеваний. Все иммуномодулирующие и иммуностимулирующие препараты, предстваленные на нашем рынке, исключительно отечественного производства. Ни один из этих препаратов не прошел клиничские исследования по формату GCP, а именно этот формат исследований, принятый во всем мире, предполагает доказательство эффективности препаратов и определяет полный спектр возможных побочных эффектов. Дизайн таких исследований очень сложный и требования к препаратам повышенные. Такие исследования, как правило, международные, мультицентровые и плацебо-конролируемыме.

Сама идея иммуномодулятора неплохая, однако, реализована она слишком примитивно. «Подстегивание» иммунной системы с целью активизации естественных механизмов борьбы с инфекцией – так регламентируется основная задача этих препаратов. Однако, иммунная система намного сложнее, чем это представляется на первый взгляд.

Когда в организм вводится раздражающий фактор, никто не знает, в каком состоянии находится иммунная система. Активизация неспецифического ответа на раздражитель теоритически должна способствовать улучшению лечебного эффекта антибактериальных препаратов, за счет перевода всей иммунной системы в активирвоанное положение.

Но проблема заключается в том, что не возможно изучить в какой степени у каждого конкретного пациента активизируется иммунная система, как долго длится этот ответ, какие механизмы активизируются паралелльно, как быстро эта система истощается и какой обратный эффект у этого «экстренного подстегивания» будет.

Легко можно предположить, что быстрый клинический эффект от такого допинга может обратиться большей частотой рецидивов заболевания за счет истощения иммунной системы. Кроме этого, возможна активизация аутоиммунных процессов, ну и самое неприятное – отсроченные эффекты – риск развития злокачественных заболеваний иммунной системы.

Пусть все перечисленные возможные последствия лечения никогда не случатся, но особенность введения на рынок лекарственного препарата предполагает его длительное изучение и доказательство его безопасности. Такого в отношении иммуномодуляторов сделано не было. Препараты слишком быстро выскочили на рынок, а система учета побочных эффектов лекарственных препаратов у нас практически не работает. Именно поэтому мы до сих пор не знаем, какой процент уже случившихся осложнений существует.

Таким образом, хочется еще раз обратиться к зравому смыслу и обычной логике. У нас в стране есть все препараты, которыми западная общественность лечит своих пациентов, без использования иммуномодуляторов и других вспомогательных средств, и их пациенты вылечиваются. Так зачем рисковать и испытвать на себе препарты, не имеющие достоверных сертификатов безопасности, признанных во всем мире.

Нужные и не нужные анализы (видео)

Пцр показал что есть воспаление

Источник

При выборе лаборатории стоит обращать внимание на уровень сервиса и ценовую политику.

Услуги и цены…

Некоторые лаборатории предоставляют возможность срочного выполнения части исследований.

Подробнее…

Прием некоторых лекарств может повлиять на результаты анализов. Узнайте, как подготовиться к сдаче биоматериала на анализ.

Подробнее…

Результаты исследований можно получить:

в личном кабинете;
по телефону;
по электронной почте;
в любом из медицинских офисов.

Подробнее…

За звучной аббревиатурой ПЦР скрывается сложная и не слишком понятная для рядового пациента расшифровка — полимеразная цепная реакция. Что же такое ПЦР-диагностика, на чем она основана и почему в последнее время ее стали считать самой перспективной технологией в постановке диагнозов, касающихся инфекционных и вирусных заболеваний? Мы расскажем о преимуществах ПЦР-метода, его особенностях и этапах проведения.

ПЦР-диагностика: что это такое?

Диагностика методом ПЦР существует чуть более 30 лет. Значительно эволюционировав за это время, она зарекомендовала себя как один из наиболее точных способов выявления инфекций. В основе метода лежит принцип многократного увеличения микроскопических концентраций фрагментов ДНК возбудителя в биологической пробе пациента в искусственных условиях. В результате сложного процесса, называемого амплификацией, под воздействием ферментов и изменения температуры (от 50 до 95°С) из одной молекулы ДНК образуется две. При этом происходит копирование участка ДНК, который присутствует только у того вида патогенного микроорганизма, который интересует врача.

Цикл образования новой молекулы ДНК занимает всего около 3 минут, а тридцати-сорока циклов вполне достаточно, чтобы получить количество молекул, необходимое для достоверного визуального определения методом электрофореза.

Кроме амплификации, то есть простого увеличения числа копий молекулы ДНК, с помощью ПЦР можно производить и другие манипуляции с генетическим материалом, например, сращивать фрагменты ДНК, вводить мутации и т.д. Это позволяет использовать ПЦР не только для диагностики инфекционных и генетических заболеваний, но и для установления отцовства, клонирования и выделения новых генов.

ПЦР-диагностика проводится в специальных лабораториях с помощью амплификационного оборудования. На сегодня существует множество различных модификаций ПЦР, включая технологии с использованием не только ДНК, но и фрагментов рибонуклеиновой кислоты (РНК). В некоторых из них амплификация осуществляется при постоянной температуре, и для их проведения специальное оборудование не требуется.

Широко применяется такой прием, как «горячий старт ПЦР», при котором пробирки с амплификационной смесью предварительно прогревают при температуре 95°С в течение 3–5 минут, для того чтобы избежать клонирования неспецифических ДНК-фрагментов.

Еще одна популярная модификация ПЦР — мультиплексная амплификация (МПА), которая позволяет проводить исследование сразу нескольких изучаемых фрагментов в одной пробирке. Это не только ускоряет и удешевляет проведение анализа, но и позволяет рассматривать одни фрагменты, получившиеся в результате реакции, в качестве положительных маркеров для других, что еще больше увеличивает точность исследования методом ПЦР.

Сферы применения метода в клинической медицине

В клинической медицине ПЦР-диагностика является одним из наиболее востребованных методов анализа в самых разных сферах:

Урогинекология. Для инфекционных заболеваний такого рода характерны слабая выраженность симптомов и хроническое течение, нередко вызывающие бесплодие и невынашивание беременности у женщин. С помощью ПЦР можно выявить наличие целого «букета» половых инфекций: хламидиоза, нескольких видов микоплазмы, уреаплазмы, трихомониаза, гарднереллы, кандиды, гонококка, трепонемы. Кроме этого, ПЦР-диагностике поддается и группа вирусов, поражающих урогенитальный тракт у обоих полов, в особенности, вирус герпеса и вирус папилломы человека. Их своевременное выявление и лечение помогает избежать риска злокачественных заболеваний шейки матки у женщин.
Неонатология. Существует множество микроорганизмов, способных поражать плод еще в утробе матери. ПЦР-диагностика позволяет эффективно выявлять наличие неонатальных инфекций как на внутриутробном этапе, так и у новорожденных. К опасным инфекциям относятся цитомегаловирус, токсоплазмы, вирусы краснухи и герпеса, хламидии, микоплазмы.
Служба крови. Чтобы избежать риска переливания, пациентам инфицированной опасными заболеваниями крови или плазмы (ВИЧ, сифилис, гепатиты) также используется метод ПЦР. Он значительно превосходит по точности серологические методы, поскольку способен выделить даже те инфекции, которые имеют длительный инкубационный период и не определяются при помощи обычных исследований в течение первых нескольких недель.
Клиника инфекционных заболеваний. К ним относятся вирус гепатита, СПИД, сальмонеллез, хеликобактериоз, холера, бруцеллез, туляремия, дифтерия, токсоплазмоз и другие инфекции.
Фтизиатрия и пульмонология. ПЦР-диагностика позволяет выявить возбудителей атипичных пневмоний и рецидивирующих хронических бронхитов, которыми являются хламидии и микоплазмы. Кроме того, с ее помощью можно не только поставить диагноз, но и провести видовую идентификацию возбудителя, т.е. выявить конкретный штамм. Метод ПЦР используется также для ранней и высокоточной диагностики туберкулеза.

На заметку
ПЦР-диагностика используется в криминалистике для определения принадлежности найденного на месте преступления биоматериала, а также в экспериментальной медицине, создании генетических паспортов, мониторинге состояния окружающей среды, анализе продуктов питания, фармакологии, ветеринарии.

Преимущества ПЦР-диагностики

Хотя ПЦР-диагностика и является относительно «молодым» методом, широкое распространение в медицинской практике она получила благодаря явным преимуществам перед другими способами анализа:

Прямое определение возбудителя инфекции. Некоторые традиционные методы, такие как иммуноферментный анализ (ИФА), выделяют только белки-маркеры, которые являются продуктом жизнедеятельности возбудителей инфекции, а потому только косвенно указывают на присутствие микроорганизмов. Наличие специфического участка в ДНК, выявленное с помощью ПЦР, безошибочно или почти безошибочно указывает на присутствие конкретной инфекции.
Высокая специфичность метода. Она обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется фрагмент ДНК, характерный только для конкретного возбудителя инфекции. Специфичность исключает возможность ложных результатов анализа, тогда как в иммунологических методах исследований ошибки вполне вероятны из-за перекрестной реакции антигенов.
Высокая чувствительность. При помощи ПЦР-диагностики можно выявить присутствие в организме даже единичных клеток вирусов или бактерий в тех случаях, когда обычными методами сделать это практически невозможно. ПРЦ определяет наличие всего 10–100 клеток в пробе, тогда как иммунологическими и микроскопическими тестами можно определить наличие инфекции при количестве клеток не менее 103–105.
Универсальность. Сходство состава всех ДНК или РНК дает возможность применять универсальные методы лабораторных исследований, диагностируя сразу несколько возбудителей из одной биологической пробы.
Скорость получения результатов. Поскольку для проведения ПЦР-диагностики не нужен посев и выделение культуры возбудителя, то и большого количества времени на нее не требуется. Весь цикл — от забора биоматериала до получения результатов — занимает 4–5 часов.
Диагностика латентных инфекций. ПЦР-методом диагностируются трудно культивируемые и некультивируемые формы микроорганизмов, встречающиеся в тех случаях, когда заболевание протекает в скрытой форме.

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей инфекции не только в организме человека, но и в почве, воде, продуктах питания.

Ограничения метода

Тем не менее не стоит думать, что ПЦР-диагностика не имеет недостатков. У нее есть свои ограничения, но их количество настолько незначительно, что не может отрицательно повлиять на популярность и эффективность метода:

Вероятность амплификации ДНК не только живого, но и погибшего микроорганизма. При проведении ПЦР-диагностики для контроля эффективности лечения необходимо соблюдать определенные требования. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка времени (1–2 месяца), за который происходит полное исчезновение возбудителя инфекции в организме.
Возможность возникновения перекрестной реакции. Подбор фрагментов ДНК (праймеров) осуществляется на основе знаний о генетическом строении конкретного микроорганизма. Но теоретически такой же фрагмент может присутствовать и у других микроорганизмов, геном которых на сегодняшний день еще не расшифрован. Их присутствие в пробе может привести к ложноположительному результату анализа.
Изменчивость микроорганизмов. Эта способность возбудителей к мутации иногда приводит к тому, что некоторые их штаммы становятся неуловимыми в процессе ПЦР-анализа.

Чтобы уменьшить риски, разработаны стандарты объемов испытаний тест-систем ПЦР-диагностики, включающие проверку на перекрестные реакции и тестирование всех известных штаммов конкретного возбудителя.

Этапы исследования методом ПЦР

ПЦР-диагностика проводится в специальной лаборатории в несколько этапов.

Забор биоматериала. Процедура, предшествующая непосредственному анализу, которая осуществляется в процедурном кабинете соответствующего профиля. Забор делается с помощью стерильного оборудования только в стерильные пробирки. Материалом для исследования могут быть:
- Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек: из уретры, из цервикального канала, со слизистой дыхательных путей и зева, из конъюнктивы. Забор проводится с помощью специального ершика, при этом недопустимо попадание в материал следов крови.
- Моча. Собираются первые 50 г утренней мочи в стерильную емкость. Материал используется для диагностики мочеполовых инфекций.
- Мокрота. Используется для ПЦР-диагностики туберкулеза и респираторных форм микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту собирают в стерильный флакон в количестве 15–20 мг.
- Кровь, сыворотка, плазма. С их помощью диагностируются гепатиты, герпес, ВИЧ-инфекция. Для анализа используется венозная кровь (1–1,5 мл), собранная у пациента натощак в стерильную пробирку. Хранить биоматериал можно не более суток при температуре 4°С. Замораживать кровь категорически запрещается.
- Биологические жидкости. К ним относятся слюна, сок простаты, околоплодная, плевральная, спинномозговая, суставная жидкости. Собираются при помощи пункции с использованием стерильного инструментария в количестве 0,1–1,5 мл в стерильные пробирки.
- Биоптаты, т.е. материалы, полученные путем биопсии. Обычно на анализ отправляют биоптаты двенадцатиперстной кишки или желудка, чтобы выявить хеликобактерную инфекцию. Объем материала 2–3 мм3.
Хранение и транспортировка биоматериала. Хранить образцы можно при комнатной температуре не более 2 часов. Если необходимо длительное хранение, то пробы помещают в холодильник с температурой 2–8°С на срок не более одних суток. Допустимо хранение некоторых биоматериалов в течение двух недель в замороженном виде при температуре -20°С. Оттаивание и повторное замораживание проб запрещено. Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов.
Выделение ДНК из образца. Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором.
Проведение ПЦР. Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2–3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные, включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные, не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе.
Регистрация результатов. Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35–40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате.
Интерпретация результатов исследования. Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения.

Цены на ПЦР-диагностику

Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1.

Таблица 1. Примерные цены на анализы ПЦР в Москве

Название анализа	Цена, руб.
Определение ДНК хламидия	750
Определение ДНК микоплазмы хоминис	540
Определение микоплазмы гениталиум	350
Определение ДНК уреаплазмы	350
Гонококк, определение ДНК	350
Определение ДНК герпеса (разные типы)	350–600
Определение ДНК кандиды	570
Вирус краснухи, определение РНК	800
Дифференцированное определение ДНК ВПЧ (разные типы)	350–1900[1]

Итак, многие медицинские центры предлагают провести ПЦР-исследование комплексно. В пакет услуги диагностики включается сразу несколько анализов, например, «ПЦР-8» (8 бактериальных и вирусных возбудителей острых кишечных инфекций) — 1400[2] рублей или «ПЦР-12» (12 половых инфекций) — 3500[3] рублей. Такая услуга позволяет существенно сэкономить деньги, поскольку при отдельном прохождении ПЦР-диагностики по каждой инфекции затраты будут намного больше.

Источник